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克霉唑陪他米松乳膏中主药及杂质二苯基

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核心提示:  克霉唑陪他米松乳膏是由克霉唑和二丙酸陪他米松制成的复方制剂,主要用于红色毛癣菌、絮状表皮菌等。我们采用HPLC法测定了该制剂中主药的含量和有关物质,方法准确、简便、快速。

  克霉唑陪他米松乳膏是由克霉唑和二丙酸陪他米松制成的复方制剂,主要用于红色毛癣菌、絮状表皮菌等。我们采用HPLC法测定了该制剂中主药的含量和有关物质,方法准确、简便、快速。

  1仪器与试药 Agilent1100型高效液相色谱仪;色谱柱为Waters C18柱(150mm×4.6mm,5μm )克霉唑对照品(批号:10037-0105,中国药品生物制品检定所)、二丙酸倍他米松对照品(批号:BET-20080501)、二苯基-(2-氯苯基)甲醇对照品(批号:100019-200603,含量100.0%,中国药品生物制品检定所);克霉唑倍他米松乳膏(上海3葆雅制药有限公司,批号:07HNBNA001)。

  甲醇为色谱纯,水为纯化水,其他试剂均为分析纯。 2有效成分含量测定方法与结果 2.1 色谱条件与系统适用性试验采用C18柱,甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(7:3)用稀磷酸调节pH至5.75为流动相;检测波长240nm。理论板数按克霉唑峰计应不低于4000,克霉唑峰、二丙酸陪他米松峰、二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰和其他杂志峰的分离度应符合要求。

  2.2测定方法取本品适量(相当于克霉唑10mg),置50mL量瓶中,加甲醇-水(7:3)适量,置50°C水浴中加热,时时振摇使溶解,取出强烈振摇5min,摇匀,放冷至室温,用甲醇-水(7:3)稀释至刻度,摇匀,用0.45μm滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液,精密量取上述供试品溶液50μL注入液相色谱仪,记录色谱图。另取克霉唑、二丙酸陪他米松对照品适量,加甲醇-水(7:3)溶解并定量制成每1mL约含克霉唑0.2mg、二丙酸陪他米松10μg的溶液,同法测定。按外标法以峰面积计算。

  2.3 波长的选择本品为复方制剂,主要成份为二丙酸陪他米松和克霉唑,二者的处方量相差较大,因此在波长选择时应兼顾二者的吸收值。二丙酸陪他米松在240nm处有最大吸收;克霉唑在260nm和220nm的波长有最大吸收,在240nm出虽不是最大吸收但吸收值较大,综合考虑两者的紫外吸收情况和样品中两成分比例,选用240nm作为含量测定的波长。二苯基-(2-氯苯基)甲醇在215nm附近有最大吸收,克霉唑在215nm波长处的响应值也较高,综合两者的情况选用215nm作为杂质含量测定的波长。

  2.4 系统耐用性分别用Waters公司、Aichron Bond-AQ、Agilent Eclips的C18色谱柱和Agilent1100、Waters2695高效液相色谱仪按上述条件试验,结果不同公司的高效液相色谱仪和色谱柱对检测影响不大,检验结果基本一致,本方法的耐用性较好。

  2.5 峰纯度检查取“1.3.3”项下经破坏处理的供试品溶液,用二极管阵列检测器在210nm至400nm的范围内扫描,克霉唑峰、二丙酸陪他米松峰壑二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰的峰纯度均在990以上,说明该方法可用于测定克霉唑、二丙酸陪他米松和二苯基-(2-氯苯基)甲醇。

  2.6 线性关系取克霉唑对照品0.1042g,置于100mL量瓶中,用甲醇-水溶液(7:3)溶解并稀释至刻度,作为克霉唑对照品储备液。分别取对照品储备液适量,用甲醇-水溶液制成每毫升含20.84、62.52、104.2、208.4、312.6、521μg的二丙酸陪他米松溶液,按“1.2.2”项下方法测定,记录色谱图,以峰面积对浓度进行线性回归,克霉唑回归方程Y=7.7542X+68.959(r=0.9997),二丙酸陪他米松回归方程Y=59.28X+0.8695(r=0.9999),说明克霉唑在20.84~521.00μg/mL范围内,二丙酸陪他米松在1.29~32.30μg/mL范围内线性关系良好。

  2.7 精密度与重复性试验精密称取试品适量,按“1.2.2”项下平行制备6份,分别进样50μL,按外标法以峰面积计算,测得克霉唑平均含量94.39%、RSD=1.10%(n=6);二丙酸陪他米松平均含量96.06%,RSD=0.75%(n=6)。取上述溶液一份,连续进样5次。克霉唑峰面积的RSD为0.16%,二丙酸陪他米松面积的RSD为0.055%。

  2.8 加样回收试验取克霉唑和二丙酸陪他米松对照品适量,用甲醇-水(7:3)制成一定浓度的对照品浓溶液;精密量取对照品浓溶液和供试品适量,按“1.2.2”项下制备成浓度为80%、100%、120%的供试品溶液各三份,按“1.2.2”项下的方法试验,克霉唑平均加样回收率为100.34%,RSD为0.77%(n=9);二丙酸陪他米松平均加样回收率为100.34%,RSD为0.95%(n=9)。

  2.9 稳定性考察按“1.2.2”项制备供试品溶液,于室温下0、2、3、4、7h分别进样。结果克霉唑峰面积的RSD=0.74%,二丙酸陪他米松峰面积的RSD=0.02%,说明供试品溶液在7h内基本稳定。

  2.10 检测限于定量限分别取克霉唑和二丙酸陪他米松对照品溶液进行稀释,按上述确定的色谱条件进样,测得克霉唑检测限位5.32ng(S/N=3)定量限为17.74ng(S/N=10);二丙酸陪他米松检测限为0.75ng(S/N=3),定量限为2.49ng(S/N=10)。

  2.11 含量测定取供试品、克霉唑对照品及二丙酸陪他米松对照品适量,照“1.2.2”项方法测定。按外标法以峰面积计算,供试品的克霉唑含量为95.26%,二丙酸陪他米松含量为96.33%。

  3 杂质二苯基-(2-氯苯基)甲醇的含量测定 3.1 色谱条件与系统适用性试验除检测波长为215mL,进样量为10μL外,其他条件同“1.2.1”项。

  3.2 测定方法取本品适量(相当于克霉唑10mg),置50mL量瓶中,加甲醇28mL,置50°C水浴中加热,时时振摇使溶解,取出强烈振摇5min,加水12mL,摇匀,放冷至室温,用甲醇-水(7:3)稀释至刻度,摇匀,用0.45μm滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液;精密量取上述供试品溶液10μL注入液相色谱仪,记录色谱图至供试品溶液主成分峰保留时间的1.5倍;另取二苯基-(2-氯苯基)甲醇对照品适量,加甲醇-水(7:3)溶解并定量,制成每毫升约含4μg的溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算。

  3.3 破坏试验取样1g三份,分别加0.1mol/L盐酸溶液5mL,0.1mol/L氢化钠溶液5mL,过氧化氢溶液5mL,煮沸,室温放置0.5h,调节pH至中性,用甲醇-水(7:3)转移至50mL量瓶中,滤过,取续滤液作为酸破坏溶液、碱破坏溶液和氧化破坏溶液。取样1g两份,分别置50mL量瓶中,加甲醇-水(7:3)适量,分别置水浴中加热1h和1000LX光照过夜,再用甲醇-水光照破坏溶液。按“1.3.1”项下方法测定。该法能有效检测出各破坏性试验产生的降解物,且降解产物峰均能与主峰达到基线分离,专属性较好。

  3.4 加样回收试验精密称取二苯基-(2-二苯基)甲醇对照品适量,用甲醇-水(7:3)制成一定浓度的对照品浓溶液;精密取对照品浓溶液和供试品适量,按“1.3.2”项下制备成浓度为80%、100%、120%的供试品溶液,按“1.3.1”项下的方法试验,二苯基-(2-氯苯基)甲醇平均加样回收率为99.83%,RSD为1.26%(n=9)。

  3.5 二苯基-(2-氯苯基)甲醇线性范围及检测限取二苯基-(2-氯苯基)甲醇对照品0.01019g,置100mL量瓶中,用甲醇-水溶液(7:3)溶解并稀释至刻度,作为对照品储备液。分别取对照品储备液适量,用甲醇-水溶液制成每1mL含10.19、5.095、2.548、2.038、1.274、1.019、0.8152、0.5095、0.2548μg的溶液,按“1.3.1”项方法测定,记录色谱图。以峰面积对二苯基-(2-氯苯基)甲醇浓度进行线性回归,回归方程为:y=68.91x+0.386,r=0.9999(n=9),结果表明,二苯基-(2-氯苯基)甲醇在5.096×10-3~0.2038μg/mL范围内线性关系良好。检测限为0.6ng(S/N=3)。

  3.6 稳定性考察按“1.3.2”项下的方法制备供试品溶液,于室温下0、1、2、4、8h分别进样10μL结果二苯基-(2-氯苯基)甲醇峰的峰面积RSD=1.36%,供试品溶液在8h内基本稳定,但仍需尽快测定。

  3.7 有关物质测定按“1.3.2”项下的方法,对供试品中杂质二苯基-(2-氯苯基)甲醇进行测定,结果含量为0.89%。

  4 讨论《新药转正标准》第37册也采用HPLC法测定克霉唑陪他米松乳膏的含量和有关物质[1],但该方法为内标法,操作繁琐、取样量大、不易滤过等。本文建立的方法克服了上述不足,方法简便、专属性强、准确可靠,可作为质量控制的分析方法。

  在流动相考察过程中发现,出峰的快慢及分离度受流动相的pH值影响较大。pH值越小,出峰越快,但不利于主峰与氧化杂质的分离;pH值越大,出峰越慢,但不利于主峰与二苯基-(2-氯苯基)甲醇杂质峰的分离。试验表明:pH值在5.7~5.8最为适宜,故本方法采用pH值5.75。

  实验中发现陪他米松和二丙酸陪他米松在该系统适用性条件下的保留时间不一致,而制剂处方中为二丙酸陪他米松而非陪他米松,所以测定含量时不能用陪他米松对照品替代二丙酸陪他米松对照品。 克霉唑在碱性介质中相对稳定,但在酸水介质中易降解成二苯基-(2-氯苯基)甲醇和咪唑[8]。克霉唑原料及制剂在合成、生产、贮存及运输等过程中都有可能造成药物的降解。

  本文建立的方法方便、快捷、准确,可有效测定克霉唑陪他米松乳膏中杂质二苯基-(2-氯苯基)甲醇的含量,从而有效控制药物的质量。

  参考文献: [1]国家药典委员会.《国家药品标准》新药转正标准[S].第37册.

  [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].2005年版.北京:工业出版社,2005:237.

  [3]美国药典委员会.美国药典[S].第27版.2004.

  [4]余进,黄毅岚,张丹,等.HPLC测定克霉唑阴道片的主药及有关物质[J].华西药学杂志,2007,22(4):443-445.

  [5]潘强,易大为,王巍.HPLC法测定克霉唑阴道片的含量[J].中国药事,2007,21(12):993-994.

  [6]毕云生,魏纪鲁,胡冠时.HPLC法同时测定克霉唑中两种有关物质的含量[J].药学服务与研究,2006,6(2):146-147.

  [7]张雁,孙映求,王兰,等.RP-HPLC法测定克霉唑溶液中克霉唑的含量[J].中国药师,2005,8(8):635-636.

  [8]Abdel-Moety EM,Khattab FI,Kelani KM,et al.Chromatographic determination of clotrimazole,ketoconazole and fluconazole in pharmaceutical formulations[J].Il Farmaco,2003,57(11):931-938.

(实习编辑:张丽娟)

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